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本制品适用于qPCR荧光定量法检测DNA的甲基化。在该产品中添加了经过特殊工艺处理的新型Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、dNTPs、PCR稳定剂和增强剂等，组成一种2×浓度的预混型试剂，适用于检测经亚硫酸盐转化后的DNA模板，对其进行定量或半定量的甲基化分析。

本制品经过优化，具有多重扩增能力，性能可靠，灵敏度高，可正常检测弱阳样本，同时荧光信号值高，支持多重扩增体系。该产品可应用于表观遗传学的研究，主要涉及肿瘤、干细胞和器官发育等。特别是在癌基因检测方面有着很好的应用。

亚硫酸氢盐处理DNA模板后，甲基化的CpG序列仍然保持CpG序列形式，未甲基化的CpG序列会转变为UpG序列。然后针对CpG和UpG所在的片段设计两对引物，进行qPCR，通过比对Ct值来确定甲基化水平。或者，只设计一对针对甲基化CpG片段的引物进行半定量分析。

• 使用本试剂前请仔细阅读本说明书，实验应规范操作，包括样本处理、反应体系的配制及加样。
  
• 加样和配液步骤尽量都在冰上操作。
  
• 每个组分在使用前都应充分震荡混匀，低速离心。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 配制常规qPCR反应体系：
  

  成分	用量
  2×Multiplex MethyLight qPCR SuperMix	12.5μL
  上游引物（10μM）	0.2～1.0μM（终浓度）
  下游引物（10μM）	0.2～1.0μM（终浓度）
  探针（10μM）	0.1～1.0μM（终浓度）
  模板	5～10μL
  RNase-Free water	至25μL

  
  
• 推荐qPCR反应程序：
  

  步骤	温度	时间	循环数	收集荧光
  预变性	95℃	5min	1	否
  变性	95℃	10s	45	否
  退火/延伸	60℃	30～40s		是